DNA sünteesi põhiprintsiip

Keemiline DNA süntees põhineb tahkefaasilise sünteesi strateegial ja fosforamidiidi keemial.Erinevalt bioloogilisest DNA sünteesist on keemilise DNA sünteesi materjaliks DMT (4,4-dimetoksütritüül) ja fosforamidiidiga modifitseeritud desoksüriboksüsiid, nagu on näidatud joonisel 1. DNA süntees viiakse läbi tahkel kandjal (saame pakkuda erinevaidOligosünteesi kolonn), st CPG (kontrollitud pooridega klaas) ja PS (polüstüreen) ning kogu süntees viiakse läbiDNA/RNA süntesaator, mis on meie peamine varustus, millel on erinev mudel, näiteks: HY ühe kanaliga süntesaator, HY-12, HY-192 jne, sünteesi suund on 3' kuni 5' ja nukleotiid viiakse tahkele kandjale ühe kaudu. sünteesitsükkel.Tavaliselt koosneb sünteesitsükkel neljast etapist: kaitse eemaldamine, sidumine, sulgemine ja oksüdeerimine (joonis 2).Kaitse eemaldamine on seatud eemaldama DMT rühma tahkel kandjal või 5' hüdroksüülrühma eelmisel nukleosiidil, kaitse eemaldamise reagendina kasutatakse 3% trikloroäädikhapet diklorometaanis.Seejärel lasti fosforamidiidiga modifitseeritud desoksüriboksüsiidil aktiveerija, st 5-etüültiotetrasooli või 4,5-ditsüanoimidasooli abil eksponeerida hüdroksüülrühma, moodustades fosfitetriestri (III) ja teostati sidestamise etapp.Korgistamise etapp viiakse läbi reageerimata hüdroksüülrühma blokeerimiseks sidestamisetapi ajal, et minimeerida soovimatute defektsete järjestuste teket.Lõpuks oksüdeeritakse ebastabiilne fosfitetriester (III) keemiliselt stabiilseks fosfortriestriks (V), kasutades püridiini koostises oksüdeerijana joodi.

Sünteesitud DNA võib tahkelt kandjalt aminolüüsi teel eraldada, fosfortriestri 2-tsüanoetüül-kaitstud rühm ja nukleoalusel olev amiid lõhustatakse samal ajal, riiulites olevad sünteesiplaadid ja sünteesikolonnid asetatakse otse reaktsioonikambrisse. selleKaitse eemaldamise seadmed.Toor-DNA-d saab nõudmisel valmistada HPLC, elektroforeesi ja OPC abil, samuti saame teile pakkudaPuhastusseadmedjäreltöötluseks.